PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO.
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS No. 199
"EMILIANO ZAPATA SALAZAR"
PREPARA SOLUCIONES PARA LAS OPERACIONES BÁSICAS DE
LABORATORIO
PROFESOR: DR. VICENTE MARTINEZ FRAGOSO.
ALUMNA: MARCO ANTONIO PARDO.
ESPECIALIDAD: LABORATORISTA CLÍNICO.
GRADO: 2 SEMESTRE GRUPO: DM
PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO.
Esta practica se llevo a cabo el día 26 de Abril del 2013 en el laboratorio de
usos múltiples del CBTis 199.
OBJETIVO: Que el alumno logre comprender y memorizar el proceso de elaboración de un medio de cultivo Mc Conkey y EMB.
CONSIDERACIONES TEÓRICAS:
AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO: El agar Eosina y Azul de Metileno es un medio utilizado para el aislamiento y diferenciación de bacilos entericos Gram negativos. Este medio también es conocido como agar EMB por sus siglas en ingles.
El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciación de las colonias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. La sacarosa esta incluida en el medio de cultivo para detectar a los miembros del grupo coliforme que fermentan mas rápidamente la sacarosa que la lactosa.
AGAR Mc Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos, permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriacea desarrollan en el mismo.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
MATERIALES:
-Mechero de Bunsen y Fisher
-Tripie
-Tela de asbesto
-Algodón
-Gasa
-Papel estraza
-Cinta testigo
-Cajas Petri
-Olla exprés
-Asa de siembra
-2 Matraz Erlenmeyer de 250 ml
-Agitador de vidrio
SUSTANCIAS:
-Muestra biológica: heces fecales y orina
-Agar EMB
-Agar Mc Conkey
-Fenol
-Agua destilada
PROCEDIMIENTO1.Lavar perfectamente dos matraces con escobillón y detergente. Enjuagar con abundante agua corriente
5. Vaciar 30 ml de agua destilada en el matraz ya seco.
7. Verter el polvo del medio Mc. Conkey al matraz, colocar este último sobre la tela de asbesto y disolver calentado. Dejarlo hervir NO MAS DE UN MINUTO.
8.Cuando se alcance el punto de ebullición, bajar el matraz del fuego, flamear el tapón y la boca del matraz, para taparlo y colocarle su capuchón de papel. Repetir los pasos 5-8 para el medio Mc. Conkey.
9.Esterilizar con autoclave los medios, de la siguiente manera:
a) En la olla exprés verter agua hasta el nivel indicado (1/3 parte)
b) Colocar la base dentro de esta y ponerla al fuego (con los mecheros Fisher)
c) Acomodar los medios y materiales en la base de la olla.
d) Cerrar la olla y esperar a que la temperatura se eleve
e) Dejar que se caliente hasta los 121°C o 15 lbs de presión revisando continuamente la escala del manómetro. Una vez alcanzada esta temperatura deberá bajarse el nivel del fuego sacando y metiendo uno de los mecheros.
f) Mantener así por 15 minutos.
g) Apagar el fuego y dejar a que la presión descienda a 0.
h) Abrir cuidadosamente la olla y sacar los medios ya esterilizados.
10. Acercar el medio al área de trabajo, que se mantiene aséptica.
11. Dejar enfriar al medio, hasta una temperatura en la que el matraz caliente pero no queme la piel, y verter suavemente en la caja o cajas Petri el medio de cultivo.
12. Una vez que se tienen solidificados los medios de cultivo, se procede a sembrar en ellos. Se toma el asa, se flamea y se toma un poco de la muestra de heces, para hacer el rayado de la placa en sectores, sembrando en ambos medios. Se flamea nuevamente el asa y se procede a la misma operación pero con la orina.
13. Se dejan incubar en la estufa de bacteriologica por un lapso de 24-48 horas.
